人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離方法說明及圖例

    A．取1ml新鮮抗凝血，與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份本分離液之液面上；

    B.  以500g（約1800轉(zhuǎn)/分）離心25分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子)。

    此時離心管中由上至下細(xì)胞分四層。*層；為血漿層。第二層；為環(huán)狀乳白色的白細(xì)胞層。第三層；為略帶混濁的分離液層（富集一定量的白細(xì)胞）。第四層；為紅細(xì)胞層。棄去*層血漿層，收集第二層細(xì)胞、第三層分離液層和第四層紅細(xì)胞層，放入含細(xì)胞洗滌液10ml的試管中，充分混勻后，以500g約（1800轉(zhuǎn)/分）離心30分鐘。沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞，再經(jīng)3次洗滌去除紅細(xì)胞內(nèi)溶物和碎片后取沉淀細(xì)胞即為所需白細(xì)胞

    注：  提取率約為80%。

    人外周血淋巴細(xì)胞分離液注意事項

    A．  本人外周血淋巴細(xì)胞分離液是敏光型的，在運(yùn)輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外，人外周血淋巴細(xì)胞分離液為真空包裝，未啟封前置于10℃  以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

    B．  待分離的樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。人外周血淋巴細(xì)胞分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20  分鐘保證人外周血淋巴細(xì)胞分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果，且所有操作過程一定要在無菌條件下進(jìn)行。

    C． 由于各品牌離心機(jī)的性能不同，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，人外周血淋巴細(xì)胞分離液可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)，調(diào)節(jié)離心的時間，摸索*的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。

    D．  使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

    E．  *抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。人外周血淋巴細(xì)胞分離液應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積。

    人外周血淋巴細(xì)胞分離液產(chǎn)品性能指標(biāo)

    pH  7.0-7.5

    滲透壓           280-340mOsmol/kg

    內(nèi)毒素                          ≤0.5EU/ml

    無菌 直接接種培養(yǎng)14  天后培養(yǎng)基澄清

    澄明度及不溶性顆粒物           每50ml  溶液中含10μm  以上的不溶性微粒20  粒以下，

    含25μm  以上的不溶性微粒5  粒以下

    人外周血淋巴細(xì)胞分離液貯藏及保存期限

    18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，人外周血淋巴細(xì)胞分離液有效期一周。

    注：若保證無微生物污染，啟封后可置4℃長期保存。人外周血淋巴細(xì)胞分離液但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易 出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。